來源：正道高級完全中學 發布時間：2014-05-28 11:12:12 瀏覽：8810
一、光學顯微鏡的結構、呈像原理、放大倍數計算方法
結構：
光學部分：目鏡、鏡筒、物鏡、遮光器（有大小光圈）和反光鏡（有平面鏡和凹面鏡）
機械部分：鏡座、傾斜關節、鏡臂、載物臺（上有通光孔、壓片夾）、鏡頭轉換器、粗、細準焦螺旋。
注：目鏡無旋轉螺絲，鏡頭越長，放大倍數越小；物鏡有旋轉螺絲，鏡頭越長，放大倍數越大。
呈像原理：映入眼球內的是倒立放大的虛像。（物鏡質量的優劣直接影響成像的清晰程度）
放大倍數：目鏡和物鏡二者放大倍數的乘積）
注：顯微鏡放大倍數是指直徑倍數，即長度和寬度，而不是面積。
二、顯微鏡的使用：置鏡（裝鏡頭）→對光→置片→調焦→觀察
1．安放。顯微鏡放置在桌前略偏左，距桌緣8—10cm處，裝好物鏡和目鏡（目鏡5× 物鏡10×）
2．對光。轉動轉換器，使低倍鏡對準通光孔，選取較大光圈對準通光孔。左眼注視目鏡，同時把反光鏡轉向光源，直至視野光亮均勻適度。調節視野亮度只可用遮光器和反光鏡，光線過強，改用較小光圈或用平面反光鏡；光線過弱，改用較大光圈或用凹面反光鏡。選低倍鏡→選較大的光圈→選反光鏡（左眼觀察）
3．觀察。將切片或裝片放在載物臺上，標本正對通光孔中心。轉動粗準焦螺旋（順時針），俯首側視鏡筒慢慢下降，直到物鏡接近切片（約0.5cm），左眼觀察目鏡，（反時針）旋轉粗準焦螺旋，使鏡筒慢慢上升，看到物像時輕微來回旋轉細準焦，直到物像清晰。（找不到物像時，可重復一次或移動裝片使標本移至通光孔中心）。．觀察時兩眼都要睜開，便于左眼觀察，右眼看著畫圖。側面觀察降鏡筒→左眼觀察找物像→細準焦螺旋調清晰
4．高倍鏡的轉換。找到物像后，把要觀察的物像移到視野中央，把低倍鏡移走，換上高倍鏡，只準用細準焦螺旋和反光鏡把視野調整清晰，直到物像清楚為止。
順序：移裝片→轉動鏡頭轉換器→調反光鏡或光圈→調細準焦螺旋
注：換高倍物鏡時只能移動轉換器，換鏡后，只準調節細準焦和反光鏡（或光圈）。
問1：低倍鏡換為高倍鏡后，若看不到或看不清原來的像，可能原因？（ABC）
A、物像不在視野中 B、焦距不在同一平面 C、載玻片放反，蓋玻片在下面 D、未換目鏡
問2：放大倍數與視野的關系：
放大倍數越小，視野范圍越大，看到的細胞數目越多，視野越亮，工作距離越長；
放大倍數越大，視野范圍越小，看到的細胞數目越少，視野越暗，工作距離越短。
故裝片不能反放。
5．裝片的制作和移動：制作：滴清水→放材料→蓋片
移動：物像在何方，就將載玻片向何處移。（原因：物像移動的方向和實際移動玻片的方向相反）
6．污點判斷：1）污點隨載玻片的移動而移動，則位于載玻片上；
2）污點不隨載玻片移動，換目鏡后消失，則位于目鏡；換物鏡后消失，則位于物鏡；
3）污點不隨載玻片移動，換鏡后也不消失，則位于反光鏡上。
7．完畢工作。使用完畢后，取下裝片，轉動鏡頭轉換器，逆時針旋出物鏡，旋進鏡頭盒；取出目鏡，插進鏡頭盒，蓋上。把顯微鏡放正。
實驗一：觀察DNA、RNA在細胞中的分布（必修一P26）
一．實驗目的：初步掌握觀察DNA和RNA在細胞中分布的方法
二．實驗原理：
1．甲基綠和吡羅紅兩種染色劑對DNA和RNA的親和力不同，甲基綠使DNA呈現綠色，吡羅紅使RNA呈現紅色。利用甲基綠、吡羅紅混合染色劑將細胞染色，可以顯示DNA和RNA在細胞中的分布。
2．鹽酸能夠改變細胞膜的通透性，加速染色劑進入細胞，同時使染色休中的DNA和蛋白質分離，有利于DNA與染色劑結合。
三．方法步驟：
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操作步驟 |
注意問題 |
解釋 |
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取口腔上皮細胞制片 |
載玻片要潔凈，滴一滴質量分數為0.9%的NaCl溶液 用消毒牙簽在自己漱凈的口腔內側壁上輕刮幾下取細胞 將載玻片在酒精燈下烘干 |
防止污跡干擾觀察效果 保持細胞原有形態 消毒為防止感染，漱口避免取材失敗 固定裝片 |
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水解 |
將烘干的載玻片放入質量分數為8%的鹽酸溶液中，用300C水浴保溫5min |
改變細胞膜的通透性，加速染色劑進入細胞，促進染色體的DNA與蛋白質分離而被染色 |
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沖冼涂片 |
用蒸餾水的緩水流沖洗載玻片10S |
洗去殘留在外的鹽酸 |
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染色 |
滴2滴吡羅紅甲綠染色劑于載玻片上染色5min |
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觀察 |
先低倍鏡觀察，選擇染色均勻、色澤淺的區域，移至視野中央，調節清晰后才換用高倍物鏡觀察 |
使觀察效果最佳 |
實驗二 檢測生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質（必修一P18）
一．實驗目的： 嘗試用化學試劑檢測生物組織中糖類、脂肪和蛋白質
二．實驗原理：某些化學試劑能使生物組織中的有關有機化合物，產生特定的顏色反應。
1．可溶性還原糖（如葡萄糖、果糖、麥芽糖）與斐林試劑發生作用，可生成磚紅色的Cu 2O沉淀。如：
加熱
葡萄糖+ Cu ( OH ) 2 
葡萄糖酸 + Cu 2O↓（磚紅色）+ H 2O，即Cu ( OH ) 2被還原成Cu 2O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。
2．脂肪可以被蘇丹Ⅲ染液染成橘黃色（或被蘇丹Ⅳ染液染成紅色）。淀粉遇碘變藍色。
3．蛋白質與雙縮脲試劑發生作用，產生紫色反應。（蛋白質分子中含有很多肽鍵，在堿性NaOH溶液中能與雙縮脲試劑中的Cu2+作用，產生紫色反應。）
三．實驗材料
1．做可溶性還原性糖鑒定實驗，應選含糖高，顏色為白色的植物組織，如蘋果、梨。（因為組織的顏色較淺，易于觀察。）
2．做脂肪的鑒定實驗。應選富含脂肪的種子，以花生種子為最好，實驗前一般要浸泡3~4小時（也可用蓖麻種子）。
3．做蛋白質的鑒定實驗，可用富含蛋白質的黃豆或雞蛋清。
四、實驗試劑
斐林試劑（包括甲液：質量濃度為0.1g/ mL NaOH溶液和乙液：質量濃度為0.05g/ mL CuSO4溶液）、蘇丹Ⅲ或蘇丹Ⅳ染液、雙縮脲試劑（包括A液：質量濃度為0.1g/ mL NaOH溶液和B液：質量濃度為0.01g/ mL CuSO4溶液）、體積分數為50%的酒精溶液，碘液、蒸餾水。
五、方法步驟：
（一）可溶性糖的鑒定
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操 作 方 法 |
注 意 問 題 |
解 釋 |
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1. 制備組織樣液。 （去皮、切塊、研磨、過濾） |
蘋果或梨組織液必須臨時制備。 </t |
